Πλήρως αυτόματη μηχανή εξαγωγής και ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων της New Tech

Πέντε δυνάμεις:
● Όργανο διαμορφωμένο με το στάδιο εκχύλισης και καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος
● Όργανο διαμορφωμένο με μονάδα εξαγωγής υπερήχων
● Όργανο διαμορφωμένο με πλήρως αυτόματο
● Όργανο διαμορφωμένο με ενίσχυση μεταβλητής θερμοκρασίας
● Το όργανο έχει διαμορφωθεί με πλήρως κλειστό κιτ αντιδραστηρίων

1. Τα αντιδραστήρια ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων πρέπει να εκχυλιστούν και να καθαριστούν;
Η αρχή της ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος είναι η εξής: κάτω από τη δράση του εκκινητή, η DNA πολυμεράση χρησιμοποιείται για την εκτέλεση αλυσιδωτής αντίδρασης ενίσχυσης στο πρότυπο DNA/RNA (που απαιτεί αντίστροφη μεταγραφή του ΝΑ) και στη συνέχεια ανιχνεύεται η ποσότητα του σήματος φθορισμού που απελευθερώνεται για να προσδιοριστεί εάν το δείγμα περιέχει το νουκλεϊκό οξύ (DNA/RNA) του προς ανίχνευση παθογόνου.

1) Τα δείγματα που δεν έχουν εξαχθεί ή καθαριστεί μπορεί να περιέχουν πολλά συστατικά που επηρεάζουν το τελικό αποτέλεσμα: νουκλεάση (η οποία μπορεί να διαλύσει το νουκλεϊκό οξύ στόχο και να προκαλέσει ψευδώς αρνητικά), πρωτεάση (η οποία μπορεί να μειώσει την πολυμεράση DNA και να προκαλέσει ψευδώς αρνητικά), βαρύ μέταλλο αλάτι (που οδηγεί στην απενεργοποίηση της συνθετάσης και προκαλεί ψευδώς θετικά), πολύ όξινο ή πολύ αλκαλικό PH (που μπορεί να προκαλέσει την αποτυχία της αντίδρασης), Ατελές RNA (που οδηγεί σε ψευδώς αρνητική αποτυχία αντίστροφης μεταγραφής).

2) Ορισμένα δείγματα είναι δύσκολο να ενισχυθούν άμεσα: θετικά κατά Gram και ορισμένα παράσιτα, λόγω των παχιών κυτταρικών τοιχωμάτων και άλλων δομών τους, εάν δεν περάσουν από τη διαδικασία εκχύλισης και καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος, το κιτ χωρίς εκχύλιση μπορεί να αποτύχει. δείγματα.

Επομένως, συνιστάται να επιλέξετε το κιτ δοκιμής ή το όργανο που έχει διαμορφωθεί με το βήμα εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος.

2. Χημική εκχύλιση ή φυσική εξαγωγή κατακερματισμού με υπερήχους;
Σε γενικές γραμμές, η χημική εκχύλιση μπορεί να εφαρμοστεί στο μεγαλύτερο μέρος της προεπεξεργασίας και του καθαρισμού.Ωστόσο, στα θετικά κατά Gram βακτήρια με παχύ τοίχωμα και σε ορισμένα παράσιτα, συμβαίνει επίσης ότι η χημική εκχύλιση δεν μπορεί να αποκτήσει αποτελεσματικά πρότυπα νουκλεϊκών οξέων, με αποτέλεσμα την ψευδώς αρνητική ανίχνευση.Επιπλέον, η χημική εκχύλιση χρησιμοποιεί συχνά ισχυρούς παράγοντες, εάν η έκλουση δεν είναι ενδελεχής, είναι εύκολο να εισαχθούν ισχυρά αλκάλια στο σύστημα αντίδρασης, με αποτέλεσμα ανακριβή αποτελέσματα.

Ο κατακερματισμός με υπερήχους χρησιμοποιεί φυσική σύνθλιψη, η οποία έχει χρησιμοποιηθεί με επιτυχία από την GeneXpert, μια κορυφαία επιχείρηση στον τομέα του POCT για ανθρώπινη χρήση, και έχει απόλυτο πλεονέκτημα στην εξαγωγή νουκλεϊκού οξέος ορισμένων πολύπλοκων δειγμάτων (όπως το Mycobacterium tuberculosis).

Ως εκ τούτου, συνιστάται να επιλέξετε ένα κιτ δοκιμής ή ένα όργανο που έχει διαμορφωθεί με ένα βήμα εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος.και είναι βέλτιστο εάν υπάρχει μονάδα εξαγωγής υπερήχων.

3. Χειροκίνητο, ημιαυτόματο και πλήρως αυτόματο;
Αυτό είναι ένα πρόβλημα κόστους εργασίας και αποδοτικότητας εργασίας.Επί του παρόντος, τα νοσοκομεία κατοικίδιων ζώων χωρίς αρκετό προσωπικό και η εξαγωγή και ανίχνευση νουκλεϊκών οξέων είναι μια εργασία που απαιτεί ορισμένες δεξιότητες και εμπειρία.Δεν υπάρχει αμφιβολία ότι η πλήρως αυτόματη μηχανή εξαγωγής και ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων είναι η τέλεια επιλογή.

4. Ενίσχυση σταθερής θερμοκρασίας ή ενίσχυση μεταβλητής θερμοκρασίας;
Η αντίδραση ενίσχυσης είναι ένας σύνδεσμος ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος και η επαγγελματική τεχνολογία που εμπλέκεται σε αυτόν τον σύνδεσμο είναι πολύπλοκη.Σε γενικές γραμμές, τα ένζυμα χρησιμοποιούνται για την ενίσχυση του νουκλεϊκού οξέος.Στη διαδικασία ενίσχυσης, ανιχνεύεται το ενισχυμένο σήμα φθορισμού ή το ενσωματωμένο σήμα φθορισμού.Σε γενικές γραμμές, όσο νωρίτερα εμφανίζεται το σήμα φθορισμού, τόσο μεγαλύτερη είναι η περιεκτικότητα του δείγματος στο γονίδιο στόχο.

Η ενίσχυση σταθερής θερμοκρασίας είναι ενίσχυση νουκλεϊκού οξέος σε σταθερή θερμοκρασία, ενώ η ενίσχυση μεταβλητής θερμοκρασίας είναι μια κυκλική ενίσχυση αυστηρά σύμφωνα με την μετουσίωση-ανόπτηση-επέκταση.Ο χρόνος ενίσχυσης σταθερής θερμοκρασίας έχει πραγματοποιηθεί, ενώ ο μεταβλητός χρόνος ενίσχυσης θερμοκρασίας επηρεάζεται σε μεγάλο βαθμό από τον ρυθμό αύξησης και πτώσης της θερμοκρασίας του οργάνου (προς το παρόν, πολλοί κατασκευαστές έχουν τη δυνατότητα να κάνουν 40 κύκλους ενίσχυσης σε περίπου 30 λεπτά).

Εάν οι εργαστηριακές συνθήκες είναι καλές και η χωροθέτηση είναι αυστηρή, είναι λογικό να πούμε ότι η διαφορά ακρίβειας μεταξύ των δύο δεν θα είναι μεγάλη.Ωστόσο, η ενίσχυση μεταβλητής θερμοκρασίας θα συνθέσει περισσότερα προϊόντα νουκλεϊκών οξέων σε σχετικά μικρότερο χρόνο.Για εργαστήρια χωρίς αυστηρό καθορισμό ζωνών και επαγγελματικό εκπαιδευμένο προσωπικό, ο κίνδυνος διαρροής αερολύματος νουκλεϊκού οξέος θα είναι μεγαλύτερος, το ψευδώς θετικό εμφανίζεται μόλις συμβεί διαρροή και το οποίο είναι εξαιρετικά δύσκολο να εξαλειφθεί.

Επιπλέον, η ενίσχυση σταθερής θερμοκρασίας είναι επίσης πιο επιρρεπής σε μη ειδική ενίσχυση όταν το δείγμα είναι πολύπλοκο (η σχετική θερμοκρασία αντίδρασης είναι χαμηλότερη και όσο υψηλότερη είναι η θερμοκρασία επέκτασης, τόσο καλύτερη είναι η ειδικότητα δέσμευσης του εκκινητή).

Όσον αφορά την τρέχουσα τεχνολογία, η ενίσχυση μεταβλητής θερμοκρασίας είναι πιο αξιόπιστη.

5. Πώς να αποφύγετε τον κίνδυνο διαρροής προϊόντων ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος;
Επί του παρόντος, πολλοί κατασκευαστές επιλέγουν τον σωλήνα PCR τύπου αδένα ως σωλήνα αντίδρασης νουκλεϊκού οξέος, ο οποίος σφραγίζεται με τριβή και η μετουσίωση θερμοκρασίας στη μετουσίωση μεταβλητής θερμοκρασίας στην ενίσχυση της PCR μεταβλητής θερμοκρασίας φτάνει τους 90 βαθμούς
Εκατονταβάθμιο .Η επαναλαμβανόμενη διαδικασία διαστολής με θερμότητα και συστολής με κρύο είναι μια μεγάλη πρόκληση για τη σφράγιση του σωλήνα PCR και ο σωλήνας PCR τύπου αδένα είναι σχετικά εύκολο να προκαλέσει διαρροή.

Είναι προτιμότερο να υιοθετήσετε την αντίδραση με ένα πλήρως σφραγισμένο κιτ/σωλήνα για να αποφύγετε τη διαρροή του προϊόντος αντίδρασης.Θα ήταν τέλειο εάν υπήρχε η δυνατότητα επεξεργασίας ενός πλήρως σφραγισμένου κιτ για την εξαγωγή και την ανίχνευση νουκλεϊκών οξέων.

Έτσι, η νέα πλήρως αυτόματη μηχανή εξαγωγής και ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων της New Tech έχει τις παραπάνω πέντε βέλτιστες επιλογές.